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行业应用

水产品中土霉素、四环素、金霉素残留量的测定方案

时间:2015-10-7 9:27:55      阅读:2356

一、方法原理    

样品经高氯酸提取,固相萃取、纯化、浓缩,微孔滤膜过滤后,直接进样。用反相色谱分离,紫外检测器检测,外标法定量。出峰顺序为土霉素、四环素、金霉素。

二、主要仪器设备

  1. 上海仪电分析高效液相色谱仪:具紫外检测器。
  2. 电子分析天平:感量为0.0001g。
  3. 预处理柱:ODS-C18
  4. 均质器
  5. 离心机:4000r/min
  6. 负压抽滤器。

三、试剂

  1. 乙腈:色谱级
  2. 磷酸二氢钠溶液:0.01mol/L,pH=2.5
  3. 土霉素、四环素、金霉素标准储备液:土霉素、四环素1mg/mL,金霉素1mg/mL,甲醇为溶剂
  4. 土霉素、四环素、金霉素混合标准使用液:土霉素、四环素0.05~1μg/mL,金霉素0.2~2μg/mL,流动相为溶剂
  5. 高氯酸溶液:1%和0.5%
  6. 甲醇:分析纯
  7. 乙二胺四乙酸二钠溶液:5%
  8. 正己烷:分析纯

四、操作步骤

1、样品处理

鱼去鳞、去皮沿背脊取肌肉;虾去头、去壳取可食肌肉部分;蟹、甲鱼等取可食部分;样品切为0.5cm×0.5cm×0.5cm的小块后混匀。

称取5g精确到0.001g样品,置于50mL离心管中,加入1%高氯酸溶液10ml,用均质器均质30s,于振荡器上振荡提取3min,以4000r/min离心10min,取上层清夜于50mL试管中,向离心管中的残渣再加入0.5%的高氯酸溶液5mL,重复操作一次,合并上清液。加入1mL正己烷,振荡1min后离心,除去正己烷相,再加入1mL正己烷,重复操作一次。

用5mL甲醇、2mL5%乙二胺四乙酸二钠溶液、5mL水活化ODS-C18柱。接着将上述水相清液上样。用10mL蒸馏水洗去杂质,以5mL甲醇洗脱,收集洗脱液,40℃水浴中氮气吹干,以甲醇定容至1mL,以0.45μm滤膜过滤。滤液备用。

2、色谱参考条件

2. 1.色谱柱:ODS-C18

2. 2.柱温:37℃

2. 3.检测器:紫外检测器,检测波长:350nm

2. 4.流动相:乙腈-磷酸二氢钠溶液22:78

2. 5.流速:1mL/min

2. 6.进样量:20μL

3、工作曲线

在上述工作条件下,分别吸取混合标准使用液各20μL进样,以峰面积为纵坐标,浓度为横坐标,绘制工作曲线。色谱图如下,出峰顺序依次为土霉素、四环素和金霉素。

4、样品测定

取样品滤液20μL进样,记录峰面积,从工作曲线算得土霉素、四环素、金霉素的含量。

5、结果计算

   样品中土霉素、四环素、金霉素的含量按下式进行计算:

X=c×V/m                

式中:

X——样品中抗生素的含量,单位为毫克每千克mg/kg;

c——样品溶液中抗生素含量,单位为微克每毫升μg/mL;

m——样品的质量,单位为克g;

V——样品溶液体积,单位为毫升mL;

计算结果保留两位有效数字。

6、方法回收率

    本方法的回收率≥70%。

7、方法检测限

本方法的检测限:土霉素≤0.05mg/kg,四环素≤0.05mg/kg,金霉素≤0.1mg/kg。出峰顺序依次为土霉素、四环素和金霉素。

 

 

 

 


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