一、维生素A

目前维生素A都是合成的，来源：（1）从动物肝脏中得到；（2）从维生素前体而得到（维生素前体：主要指类胡萝卜素，主要是β-胡萝卜素）。

二、测定方法简述

维生素A的测定常用的方法有三氯化锑比色法、紫外分光光度法、荧光光度计分析法、液相色谱法。

对于三氯化锑比色法适用于样品中含V_A高的样品，方法简便、快速、结果准确，但是对维生素A含量低的样品，如每克样品中含5～10μg维生素A时，这时样品由于受其脂溶性物质的干扰，不应用比色法测定。

对于紫外分光光度法不必加显色剂显色，可直接测定维生素A的含量，对样品中含V_A低的也可以测出可信结果，操作简便、快速。

三、测定步骤

⑴ 样品用有机溶剂萃取脂类

样品可以根据脂肪的测定处理脂肪，即索氏抽提法，采用乙醚作提取剂，也可用热苯回流方法提取脂类。如果样品中含蛋白质和淀粉多的情况下可采用乙醚提取法。

⑵脂类的皂化

脂类有维生素和脂肪这两部分通过皂化（50%KOH、无水C₂H₃OH、热回流）把它们分开，得到一部分皂化物和一部分不皂化物。

皂化条件：

C₂H₃OH︰脂类 = 8︰1；

KOH量 = 脂量×皂化价（mg）×2.5；

皂化温度与时间：70℃、30分钟

在皂化时可以加入抗氧剂连苯二酚和对苯二酚，防止氧化。

⑶ 提取：不皂化物和皂化物经水、苯、乙醚萃取可得到不皂化物。

⑷ 柱层析分离干扰物质

采用柱层析分离干扰物质，如果柱层析把β-胡萝卜素也洗脱下来，那么这时维生素A与β-胡萝卜素就是一个混合物，还要将它们分离开。如果样品中只有维生素A而不含β-胡萝卜素时，这时可直接定容。

维生素A与β-胡萝卜素分离：

吸附剂： 8分中性Al₂O₃和2分碱性Al₂O₃混合，装柱

分离方法：a. 用2%丙酮石油醚洗β-胡萝卜素；b.用乙醚洗V_A。

四、测定方法

⑴ S_bCl₃比色法

维生素A／CHCl₃ ＋ S_bCl₃／CHCl₃→形成兰色物质→在620nm有最大吸光峰

这种兰色物质不稳定，很快褪色或变成其它物质，所以在分析时最好在暗室中进行，并且做标准曲线。

计算：每百克样品含V_A的量= C×（V1/V2）×（100/W）

C：从标准曲线上查得V_A的量

V₁：CHCl₃定容的量

V₂：测定所取样液体积

⑵ 紫外分光光度法

a.原理

V_A为脂溶性的，测定V_A时必须先将样品中的脂肪抽提出来进行皂化，萃取不皂化部分，在经柱层析除去杂质等干扰物质，在紫外328nm下测定，求出含量。

b.方法

1）提取及皂化

称样10.00g → 于烧杯中 →加40ml水搅匀 → 移250ml分液漏斗中 → 加氨水5ml → 加乙醇35ml →摇匀 → 用乙醚抽提（每次40ml抽提三次） → 收集乙醚层 → 用10ml水洗乙醚层三次 →水层再用30ml乙醚抽提一次 → 合并所用乙醚 → 用索氏法除乙醚→ 待瓶中乙醚除尽后 → 加30ml80%的KOH → 40mlC₂H₅OH →加0.8g焦性没食子酸 → 83℃水浴30分钟（皂化脂肪）→ 冷却后移入250ml分液漏斗中 → 加60ml水 → 用40ml乙醚抽提三次 →合并乙醚抽提液 → 用水洗至中性 →用索氏法除乙醚 → 除去后用5ml石油醚溶解瓶中内容物 → 然后移入刻度试管中

2）层析

在层析柱内装8cm高度中性氧化铝 → 2cm高度碱性氧化铝及1cm无水硫酸钠→ 以石油醚浸透 → 装皂化后的样液慢慢于柱内→ 用1～2ml石油醚洗试管 → 洗液倒入柱内，活塞打开以每分钟为35滴左右的速度打开，当液面降到接近硫酸钠时 → 加5ml石油醚→ 随后用5ml洗脱液逐次洗涤。

层析柱上第一个黄色层析层，一般是β-胡萝卜素，此带在12%洗脱液前后洗去，收集于10ml容量瓶中直到流出物不呈黄色为止，此层可测β-胡萝卜素用，而V_A一般在50%洗脱液洗出，用2ml刻度吸管收集1ml。吸约0.2ml于小试管中→加0.3ml25%三氯化锑→溶液如呈兰色→表明有V_A存在，故0.5ml用石油醚定容10ml。

3）样液测定

以石油醚为空白 

4）计算                                           

VA(I.μ100G)=(E×10⁶×2)/(1830×100×W)×(1000/0.3)    

0.3 ：每0.3μg V_A相当于1 I.μE：消光值，W：样品重量（g），1830：石油醚中其消光值1%cm为1830，（I.μ）： 一个国际单位，维生素A相当于0.6 μgβ-胡萝卜素。