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常见三种色谱法的特点及应用

时间:2017-5-2 10:03:22      阅读:1259

 色谱作为一种分离技术与方法,自20世纪40年代以后,逐渐得到发展,而且其势头越来越猛,从技术到理论,再到各种分离模式,以及在生物学、医学、药物临床、化学化工、食品安全、环境监测、商品检验、法医检验等领域都有广泛的应用,现已成为分析化学学科中的一个重要分支,对科学的进步和生产的发展起着重要的作用。各种色谱仪器已成为各类研究室、实验室极为重要的仪器设备。

 经常会用到的色谱法主要有五种:柱色谱法、薄层色谱法、高效液相色谱法、气相色谱法和超临界流体色谱法。本文主要介绍前三种。

一、柱色谱法

是最原始的色谱方法。

该方法将固定相注入下端塞有棉花或滤纸的玻璃管中,将被样品饱和的固定相粉末摊铺在玻璃管顶端,以流动相洗脱。

常见的洗脱方式有两种:一种是自上而下依靠溶剂本身的重力洗脱,另一种:自下而上依靠毛细作用洗脱。

收集分离后的纯净组分也有两种不同的方法:一种方法是在柱尾直接接受流出的溶液,另一种方法是烘干固定相后用机械方法分开各个色带,以合适的溶剂浸泡固定相提取组分分子。

柱色谱法被广泛应用于混合物的分离,包括:对有机合成产物、天然提取物以及生物大分子的分离。

二、薄层色谱法(TIC

是应用非常广泛的色谱方法。

这种色谱方法将固定相涂布在金属或玻璃薄板上形成薄层,用毛细管、钢笔或者其他工具将样品点于薄板一端,之后将点样端浸入流动相中,依靠毛细作用令流动相溶剂沿薄板上行展开样品。

薄层色谱法成本低廉、操作简单,被用于对样品的粗测、对有机合成反应进程的检测等用途。

三、高效液相色谱法(HPLC

是目前应用最多的色谱分析方法。

高效液相色谱系统由流动相储液瓶、输液泵、进样器、色谱柱、检测器和记录器组成,其整体组成类似于气相色谱,但是,针对其流动相为液体的特点作出很多调整。HPLC输液泵要求输液量稳定平衡;进样系统要求进样便利、切换严密;由于液体流动相黏度远远小于气体,为了减低柱压,高效液相色谱的色谱柱一般比较粗,长度也远小于气相色谱柱。

HPLC应用非常广泛,几乎遍及定量定性分析的各个领域。高效液相色谱法依据溶质(样品)在固定相和流动相中分离过程的物理化学原理可以分为以下几种:

①吸附色谱:用固定吸附剂做固定相,以不同极性溶剂做流动相,依据样品中各组分在吸附剂上吸附性能的差别来实现分离。

②分配色谱

③亲水作用色谱

④疏水作用色谱

⑤离子色谱

⑥体积排阻色谱

⑦亲和色谱

(内容来源《有害物质分析—仪器及应用》)

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