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一、荧光分光光度计的原理
荧光定量分析多采用工作曲线法,即以已知量的标准物质,按试样相同方法处理后,配成一系列标准溶液,测定其相对荧光强度和空白溶液的相对荧光强度,扣除空白值后,以荧光强度为纵坐标,标准溶液浓度为横坐标,绘制工作曲线。然后将处理后的试样配成一定浓度的溶液,在同一条件下测定其相对荧光强度,扣除空白值后,从工作曲线上求出荧光物质的含量。
二、荧光分光光度计的组成
荧光分光光度计的基本结构包括光源、发射单色器、样品室、激发单色器及检测器。
1、光源:F98荧光分光光度计光源为氙弧灯,能发射出强度较大的连续光谱,且在300nm~400nm范围内强度几乎相等,故较常用。f96s荧光分光光度计采用led冷光源。
2、发射单色器:置于样品室和检测器之间的为发射单色器或第二单色器,常采用光栅为单色器。作用是筛选出特定的发射光谱。
3、样品室:通常由石英池(液体样品用)或固体样品架(粉末或片状样品)组成。测量液体时,光源与检测器成直角安排,测量固体时,光源与检测器成锐角安排。
4、激发单色器:置于光源和样品室之间的为激发单色器或第单色器,筛选出特定的激发光谱。
5、检测器:荧光分光光度计一般用光电管或光电倍增管作检测器。可将光信号放大并转为电信号。