1、液相色谱柱的活化
对于液相色谱柱而言，每根色谱柱在装运之前都经过了测试，并存放在测试洗脱液中进行运输。因此在首次使用时，反相柱建议80%的甲醇使用检测样品1/2的流速冲洗4小时，再用流动相彻底地平衡色谱柱即可进样分析。如果使用流动相添加剂（如缓冲液或离子对试剂），建议使用含原有比例但不含这些添加剂的流动相进行中间过渡10至20个色谱柱体积再更换成分析样品流动相。对于具有较短化学链（例如C8、苯基、CN）键合相的色谱柱，应小心确保在使用色谱柱之前对其进行彻底的平衡。这样可确保重复性，并有助于防止保留时间的漂移。
正相溶剂和反相溶剂是不互溶的，这一点不能忽略。对于新购柱子，首先请注意打开分析测试说明书，了解柱子的保存溶剂。如果保存溶剂与你将要使用的流动相不互溶，请先用异丙醇过渡。过渡过程中注意因异丙醇粘度较大，会导致柱压升高，适当调低流速。如果流动相中含有缓冲盐类，先用不含缓冲盐的同比例流动相过渡，避免缓冲盐的析出。
2、C18色谱柱的活化
C18色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，是中国药典特征谱图唯一指定的色谱柱，也是最常用的液相色谱柱之一。对于拿到一根新C18柱的时候应该怎样进行活化及维护呢？
新柱活化，实际上是一个平衡的过程，色谱柱在运输和储存过程中，有可能出现柱内溶剂挥发的情况，导致填料干掉，键合相得不到充分润湿，因此需要活化。按照厂家色谱柱说明书的操作进行活化即可。除了用流动相平衡外，有时候还必须用所测样品对新柱进行平衡，具体平衡方式也很简单，把前面用来平衡的进样样品浓度加大，或者不等洗脱完成，连续进样多针。用待测物对新柱平衡，目的是将硅胶基质填料表面具有非特异性吸附的位点的吸附能力饱和掉。
C18柱会用甲醇从小流量到大流量慢慢活化，因为低流速的甲醇可以很好的浸润固定相，使键合相很好的伸展，用溶剂平衡好系统后，可以采取多次进样或者加大进样量的方式以更快的获得重现的色谱图，这样用样品将色谱柱中的活性位点饱和，就不会出现异常色谱现象的情况。
