荧光分光光度计是常用的定性定量分析测试仪器，广泛适用于医药卫生、临床检验、生物化学、石油化工、环保监测等部门。怎样用荧光分光光度计测定样品浓度呢？本文以棱光F95S为例，说明荧光分光光度计测定样品浓度的步骤。

棱光F95S荧光分光光度计

一、使用标样功能测定样品浓度

1、使用标样功能的条件

(1)标准曲线基本过零点；

(2)分析规程较稳定；

(3)标准样品浓度愈接近参比样品浓度测定结果愈准确，一般在要求定量浓度范围 2/3 左右为可。

2、使用标样功能方法测定样品浓度的步骤

(1)按下仪器总电源开关。

(2)主机预热 30 分钟。

(3)旋转“波长调节旋钮”，至标准样品吸收光谱峰值波长处。

(4)按“模式”选择键，进入主菜单界面，选择执行荧光值测定功能。

(5)准备样品

配置好标准样品 4-5 份，如按样品溶液浓度从低到高依次为 A1、A2、A3、A4、A5。荧光样品池一盛参比溶液作参比（或试剂空白），荧光样品池二装入标准样品溶液 A5 然后用擦镜纸将四壁擦试干净。

(6)灵敏度设定

打开样品室盖，样品池二置入样品座上，合上样品室盖。然后按“归一”调整键，调节至LCD液晶显示窗显示荧光值显示在 10-100 左右之间，记下此时的灵敏度档位。

(7)调零

打开样品室盖，取出样品池二，把样品池一置入样品座上，合上样品室盖。然后按“调零”调整键，仪器自动调整 0%，至 LCD 液晶显示窗显示 0.0±0.1%止。如发现 0%有漂移，继续按下“调零”调整键，直至 LCD 液晶显示窗显示 0.0±0.1%为止。

(8)按“模式”选择键，执行标样测定功能。

(9)放入标准样品并进行标样：打开样品室盖，取下样品池一，然后把荧光样品池二置入样品室内的样品座上，合上样品室盖。然后输入该样品的浓度，荧光值为直接获取当前样品的荧光值，然后按下确定键，进入下一个标样设定。

(10)打开样品室盖，倒出样品池二里的溶液并清洗干净，然后注入A4标准样品，擦干样品池外壁并放置到样品座上。合上样品室盖。然后输入该样品的浓度，荧光值为直接获取当前样品的荧光值，按下确定键，进入下一个标样设定。

(11)重复第（10）步序，依次进行A3、A2、A1 标准样品的标样设定，按下确定键进入浓度显示界面。

(12)放入待测样品并读数：打开样品室盖，倒出样品池二里的溶液，清洗干净后注入待测溶液。然后把样品池二置入样品室内的样品座上，关闭样品室盖。待 LCD 液晶显示窗显示的数值稳定下来之后即可读出仪器测得的待测样品的荧光值和浓度。

(13)继续测定其它样品，或关闭仪器总电源开关。

二、使用系数功能测定样品浓度

1、使用系数功能测定样品浓度的条件：斜率和截距已知。

2、使用系数功能测定样品浓度的步骤

(1)按下仪器总电源开关。

(2)主机预热 30 分钟。

(3)旋转“波长调节旋钮”，至标准样品吸收光谱峰值波长处。

(4)按“模式”选择键，进入主菜单界面，选择执行荧光值测定功能。

(5)准备样品：荧光样品池一盛参比溶液（或试剂空白），荧光样品池二装入待测样品溶液然后用擦镜纸将四壁擦试干净。

(6)灵敏度设定：打开样品室盖，样品池二置入样品座上，合上样品室盖。然后按“归一”调整键，调节至LCD液晶显示窗显示荧光值显示在 10-100 左右之间，记下此时的灵敏度档位。

(7)调零：打开样品室盖，样品池一置入样品座上，合上样品室盖。然后按“调零”调整键，仪器自动调整0%，至LCD液晶显示窗显示 0.0±0.1%止。如发现 0%有漂移，继续按下调零调整键，直至LCD液晶显示窗显示 0.0±0.1%为止。

(8)设定系数：按“模式”选择键，进入主菜单界面，选择执行系数测定功能并输入已知的斜率和截距。然后按下确定键，浓度显示界面。

(9)读数：打开样品室盖，样品池二置入样品座上，合上样品室盖。待 LCD 液晶显示窗显示的数值稳定下来之后由LCD液晶显示窗直接读出仪器测得的待测样品的荧光值和浓度。

(10)继续测定其它样品，或关闭仪器总电源开关。