液相色谱使用时,经流动相冲洗,柱与流动相达到平衡后,检测器测出一段时间的流出曲线即基线,一般应平行于时间轴。基线信号的波动即噪音,通常因电源接触不良或瞬时过载、检测器不稳定、流动相含有气泡或色谱柱被污染所致。基线随时间的缓缓变化即漂移,主要由于操作条件如电压、温度、流动相及流量的不稳定所引起,柱内的污染物或固定相不断被洗脱下来也会产生漂移。
液相色谱基线波动影响样品测试,如何排查呢?
1、液相系统没有平衡好,柱子里的流动相一直在变化,导致基线波动;
2、没有脱气机的仪器,当流动相未脱气或脱气未彻底时,基线会出现尖刺峰;
3、当色谱柱被污染时,也会造成基线波动;
4、检测器的流通池被污染,造成吸收的不恒定,此时需要清洗流通池;
5、检测器灯能量不足时,吸收会变得不稳定,这时基线一般也不稳定,特别是在低波长处尤为明显;
6、当使用低波长检测时,有时流动相会使用两相或以上的等度,这时混合器的很小的混合比例的误差都会被放大,很有可能会使基线发生波动;
7、流动相里的有机相的截止波长最好要小于检测波长20nm以上;
8、实验室环境不稳定,比如温度忽高忽低,气流不断变化等;
9、仪器出现问题也会造成基线波动,这种情况下通常也会出现压力不稳。比如流动相过滤头堵塞、入口主动阀滤芯污染、单向阀被污染物堵塞、泵头有气泡、系统流路漏液,比如管路裂开、peek接头没完全连上色谱柱而导致的泄露等。
举例:做多肽药物时,流动相A:0.1%或者1%TFA水溶液,流动相B:0.1%或者1%TFA乙腈溶液,基线波动大,流动相中不加TFA时见不到主峰,基线良好。很明显这是TFA加入流动相里,走梯度情况下造成的基线波动。TFA优于其他离子修饰剂的原因是它容易挥发,可以方便地从制备样品中除去。另一方面,TFA的紫外最大吸收峰低于200nm,因此在低波长下容易出现基线干扰。解决办法可以建议在其中一瓶流动相中等比例加入另一瓶流动相的溶液。
(内容参考仪器信息网)