液相色谱柱使用寿命大约为1000针,保护柱的寿命大约为280针。色谱柱的使用寿命主要受色谱条件、使用方式和保存条件的影响。
一、色谱条件
1、在相同实验中,以前使用的色谱柱寿命长很多
这种情况应该检查一下色谱条件是否保持一致,样品的组成、样品中强吸收的污染物会破坏色谱柱的柱效。检查管路的密封圈是否完好?脱落的密封圈会堵塞色谱柱过滤器和填料的顶层,从而影响样品的分布。
如果可以确认色谱条件没有变化,那么可以推测是柱床松动的原因。在实验室和运输过程中色谱柱剧烈的震动都会导致柱床松动。
2、在实验中用过的所有的色谱柱在使用相同次数后全部损坏
最大可能是样品中的成分吸附在色谱柱的顶端。可能是在流动相中不溶的沉淀物或者是强吸收的物质。
二、使用方法
按照生产商的说明使用柱子的话一般很少发生,但实际使用中会出现各种情况。
1、流动相pH超出使用范围,导致的柱子键和相水解或基质溶解。样品用强酸或强碱溶解的话也会发生上述情况。
2、高温也会导致色谱柱损坏,如高温会加速键合相溶解。
3、特殊柱子注意事项,例如氨基柱可以和醛,酮反应。氨基柱在不含缓冲盐的水溶液中会显强碱性,分解部分硅胶;
4、暴露在错误溶剂中的柱子会发生坍塌,因为这些柱子是基于非常松散的结构,是因颗粒之间的黏着而部分的结合在一起的。如果置于能破化这种黏着的流动相中,柱床很有可能会坍塌。氰基柱在中性溶液,苯基柱在THF中有时就会发生这种问题。这也是不要冲洗柱子的另一个理由。
5、采用合适的样品准备技术处理样品。用和分析柱相似的固相萃取柱进行固相萃取(SPE)。
6、使用保护柱。保护柱是作为牺牲柱装在色谱柱前使用的,出现问题的时候就会被替换掉。保护柱的填料和装填技术必须和分析柱一样;
7、反冲柱子。反现在的装填技术可以使柱子承受反冲,能更好的去除柱头端的污染物。
三、保存条件
反相色谱柱每天实验后的保存:使用缓冲液或含盐的流动相,实验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟,洗掉色谱柱中的盐,再用甲醇冲洗30分钟。注意:不能用纯水冲洗柱子,应该在水中加入10%的甲醇,防止将填料冲塌陷。
如色谱柱要长时间保存,必须存于合适的溶剂下。对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中,正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中,离子交换柱可以储存于水(含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞)中,并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。储存的温度最好是室温。
(内容参考仪器信息网)