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旋光法测定淀粉含量的应用方案说明

时间:2017-8-30 10:21:43      阅读:2678

一、实验原理

淀粉是植物的主要能量贮藏物质,主要存在于种子、块根和块茎中。除此外,淀粉在工业上的应用也很广泛。

将磨细的含淀粉样品与酸性氯化钙溶液共煮,可使样品中淀粉轻度水解,同时由于钙离子与淀粉分子上的羟基络合,使淀粉分子充分地分散到溶液中,成为淀粉溶液。淀粉分子具有不对称碳原子,因而具有旋光性,利用旋光仪测定淀粉溶胶的旋光度(α),旋光度的大小与淀粉的浓度成正比,据此可以求出淀粉含量。
   应注意的是,酸性氯化钙溶液必须保持pH 值2.30,密度1.30,加时间的长短也要控制在一定范围,以保证各种不同来源的淀粉溶液的比旋度[α]恒定不变(20℃)。样品中其他旋光性物质(如糖分)必须预先除去。
二、所需仪器、原料和试剂
样品:植物样品、面粉或其他风干样品

仪器:旋光仪及附件、粉碎机、离心机、电子分析天平、三角瓶、分样筛(100目)、布氏漏斗、抽滤瓶及真空泵、离心管、小电炉。

               
试剂:
1.醋酸—氯化钙溶液:
500g氯化钙溶于600mL 蒸馏水中,过滤至澄清,用比重计在20℃条件下调节比重1.3左右,再滴加冰乙酸调pH 为2.3。
2.30%ZnSO4溶液
3.15%K4Fe(CN)溶液
三、操作步骤
1、样品准备
(1)称样脱脂:将样品风干、研磨,通过100目筛,精确称取约2.5g样品细粉(要求含淀粉约2g),置于离心管内,加乙醚数mL 到离心管内,用细玻棒充分搅拌,离心,倾出上清液,再加入乙醚如此操作数次,以去除样品的大部分油脂、色素等成分(因油脂的的存在会使以后淀粉溶液的过滤困难)。
收集上清液以备回收乙醚。大多数谷物样品含脂肪较少,可免去这个脱脂手续。
(2)抑制酶活性:加含有氯化高汞的乙醇溶液10mL 到离心管内,充分搅拌,然后离心,倾去上清液,得到沉淀物。
(3)脱糖:加80%乙醇10mL 到离心管中,充分搅拌以洗涤沉淀物(每次都用同一玻棒),离心,倾去下清液。重复洗涤数次以去除可溶性糖分。
2、溶提淀粉
(1)加醋酸-氯化钙:先用醋酸氯化钙溶液约10mL 加到装有脱脂样品的离心管中,搅拌后全部倾入250mL三角瓶内,再用醋酸氯化钙溶液50mL分数次洗涤离心管,洗涤液并入三角瓶内,搅拌玻棒也转移到三角瓶内。
(2)煮沸溶解:先用蜡笔标记液面高度,直接置于加有石棉网的小电炉上,在5min内快速煮沸,保持沸腾15~17min,立即取下三角瓶,置流水中冷却。煮沸过程中要时加搅拌并调节温度,防止烧焦或泡沫涌出瓶外,必要时加水保持液面高度。
3、沉淀杂质和定容
(1)加沉淀剂:将三角瓶内的水解液转入100mL 容量瓶,用醋酸氯化钙溶液充分洗涤三角瓶瓶,并入容量内,加30%ZnSO41mL 混合后,再加15%K4Fe(CN)1mL,用水稀释至接近刻度时,加95%乙醇数滴以破坏泡沫,然后稀释到刻度,混合、静置,以使蛋白充分沉淀。
(2)过滤:布氏漏斗(加一层滤纸)抽气过滤。先倒上清溶液约10mL 于漏斗滤纸上使完全湿润,待溶液流干后,弃去滤液,再倒溶液进行过滤,用干燥的容器接受此滤液,收集约50mL,供测定之用。
4、测定旋光度
以空白液(乙酸—氯化钙溶液:蒸馏水=6:4)调旋光仪零点,再将旋光测定管装满滤液,小心地按照旋光仪使用说明,进行旋光度的测定。
四、计算

用工作曲线来求得淀粉含量。

(内容来源物光网)

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