一、原理
H2O2与硫酸钛(或氯化钛)生成过氧化物—钛复合物黄色沉淀,可被H2SO4溶解后,在415nm波长下比色测定。在一定范围内,其颜色深浅与H2O2浓度呈线性关系。
二、仪器和用具
研钵;移液枪0.2ml和枪头,5ml×1支;容量瓶10ml×7个,离心管5ml×8支;离心机;紫外可见分光光度计。
三、试剂
100μmol/L H2O2试剂;2mol/L硫酸;5%(W/V)硫酸钛;丙酮;浓氨水。
30% H2O2指的是过氧化氢溶液的质量比,其密度为1.1g/cm3,而过氧化氢的分子量是34.02,通过这些参数,我们可以推算出30%的过氧化氢的摩尔浓度为9.7mol/L.
四、方法
1.制作标准曲线:取10ml离心管7支,顺序编号,加入试剂。测定H2O2浓度标准曲线配置表。
待沉淀完全溶解后,将其小心转入10ml容量瓶中,并用蒸馏水少量多次冲洗离心管,将洗涤液合并后定容至10ml刻度,415nm波长下比色。
2.样品提取和测定
(1)称取新鲜植物组织2~5g(视H2O2含量多少而定),按材料与提取剂1∶1的比例加入4℃下预冷的丙酮和少许石英砂研磨成匀浆后,转入离心管3000 r/min下离心10min,弃去残渣,上清液即为样品提取液。
(2)用移液管吸取样品提取液1ml,按表35-1加入5%硫酸钛和浓氨水,待沉淀形成后3000rpm/min离心10min,弃去上清液。沉淀用丙酮反复洗涤3~5次,直到去除植物色素。(3)向洗涤后的沉淀中加入2mol硫酸5ml,待完全溶解后,与标准曲线同样的方法定容并比色。
3.结果计算
植物组织中H2O2含量(μmol/g Fw)=
式中 C—标准曲线上查得样品中H2O2浓度(μmol);
Vt—样品提取液总体积(ml);
V1—测定时用样品提取液体积(ml);
FW—植物组织鲜重(g)。
文章来源:中国化工仪器网